研究開発・学会発表

【発表の概要】

【目的】胚盤胞の凍結保存方法について検討した 。胚凍結における平衡化液 ( Equilibration Solution：ES ) への浸漬時間の長短、胞胚腔収縮法
(Artificial Shrinkage:AS)1)ならびに補助孵化療法(Assisted Hatching：AHA)の有無による、融解後の胚の生存率、一部変性率、着床率、妊娠率を後方視的に比較検討した。

【方法】2005 年1月から2007年10月までにGardnerらの分類で Grade 3以上の胚盤胞を凍結し、融解後単一胚盤胞移植を施行した 345 周期を対象とした。胚凍結は vitrification kit vitrification media ( 北里バイオファルマ )を用い、胚を ES にて平衡化後、ガラス化液に投入しクライオトップにのせ液体窒素中で保存した。胚の融解はvitrification kit thawing media ( 北里バイオファルマ ) を用いて行った。融解胚は BlastAssist System Medium 2を用いて培養し移植に用いた。ASはレーザー( ZILOS-tkTM，Hamilton Thorn Bioscience Inc. )を用いて行った。AHAはレーザーを使用し透明帯を切開した。
＜検討１＞ ES 浸漬時間の検討 : AS および AHA を施した胚盤胞を用いて、ES浸漬時間を5分にした群（ 5分群 ）と10～15分にした群(10分以上群 )で成績を比較した。
＜検討２＞ ASおよび AHAの有用性の検討：ES浸漬時間を10分以上とした胚盤胞を用いて、ASとAHAを施行した胚（ ASH有り群 ）と施行しなかった胚（ASH無し群）での成績を比較した。
検討項目は融解後の胚の生存率、一部変性率（ 融解胚の一部が変性している胚の割合）、融解胚あたりの着床率（ 胎嚢が確認できた割合 ）および妊娠率（ 心拍確認できた割合 ）とした。

【結果1】検討１において、5 分群と 10 分以上群でそれぞれ、胚生存率は 100.0 ％（ 47／47 ）と 98.7 ％（ 157／159 ）、一部変性率は4.3％(2/47）と13.2％（21/159）、着床率は44.7％（21/47）と 43.4％(69/159 )､妊娠率は34.0％(16/47)と40.3％（64/159）であった。各項目で両群間に統計学的有意差は認めなかったが、10分以上群で一部変性率は高い傾向にあった。しかし、妊娠率は10分以上群は5分群より高い傾向であった。

【結果2】検討２において、ASH有り群と ASH無し群でそれぞれ、胚生存率は 98.7％( 157/159 ）と 95.0％( 132/139 ）、一部変性率は13.2％( 21/159 )と9.4％( 13/139 )、着床率は43.4％( 69/159 )と47.5％(66/139)、妊娠率は 40.3％(64/159)と41.0％（57/139）であり各項目で両群間に有意差は認めなかった。

【結論】ES 浸漬時間5分と10分以上では胚の生存率、一部変性率、融解胚あたりの着床率および妊娠率に有意差は認めなかったが、10分以上で妊娠率が高い傾向があった。凍結前にASおよび AHAを施行することの有用性は認めなかった。今後さらに、検討を重ねより良い胚凍結条件を見つけていきたい。

【参考文献】1）Mukaida T, Oka C, Goto T and Takahashi K：Artificial shrinkage of blastocoeles using either a micro-needle or a laser pulse prior to the cooling steps of vitrification improves survival rate and pregnancy outcome of vitrified human blastocysts. Hum.Reprod. 2006 Dec;21(12):3246-52.